Nghiên cứu cố định Beta - Mannanase trên thành tế bào lợi khuần Lactobracillus Plantarum sử dụng móc neo LysM (Theo phương thức non-GMO)

Abstract

LysM domains là những miền protein có thể được dùng để mang các protein cố định lên thành tế bào của vi khuẩn theo cơ chế không cộng hóa trị. Trong nghiên cứu này, móc neo LysM 3014 từ protein Lp_3014 (một loại transglycosylase ngoại bào giả định) của Lactobacillus plantarum (L. plantarum) đã được sử dụng để cố định mannanase (ManB) từ Bacillus licheniformis DSM13 lên thành tế bào lợi khuẩn (L. plantarum) WCFS1. Đầu tiên, protein tái tổ hợp ManB-LysM 3014 được biểu hiện ở Escherichia coli Rosetta. Sau đó, quá trình cố định ManB lên bề mặt tế bào L. plantarum WCFS1 được khảo sát với các yếu tố như khối lượng tế bào, hoạt độ enzyme, nhiệt độ, thời gian, tốc độ lắc. Kết quả cho thấy, hiệu suất cố định ManB trên bề mặt tế bào L. plantarum đạt giá trị cao nhất là 54,32% khi ủ hỗn hợp dịch chiết enzyme thô có hoạt độ ManB ban đầu là 15 U/ml với một lượng sinh khối tế bào thu nhận từ 1 ml canh trường có giá trị OD600nm khoảng 2 tại ở 37°C, trong 24 giờ và kết hợp lắc với tốc độ 200 rpm. ManB cố định trên bề mặt tế bào có khả năng tái sử dụng 4-5 lần và hoạt tính enzyme ổn định trong 10 ngày khi được bảo quản ở 4 C với 20% glycerol. Trong nghiên cứu này, sự có mặt của sản phẩm MOS hình thành trong hỗn hợp phản ứng enzyme cũng được khẳng định bằng phương pháp sắc ký bản mỏng.