Xây dựng quy trình phát hiện đồng thời tác nhân gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tính (AHPND) và bệnh đốm trắng (WSD) trên tôm bằng phương pháp Duplexx Real - Time PCR

Abstract

Ngành nuôi tôm luôn phải đối mặt với nhiều loại dịch bệnh và có nguy cơ gây thiệt hại rất lớn cho người nuôi. Trong số các bệnh nguy hiểm trên tôm phải kể đến đó là bệnh đốm trắng (WSD) và bệnh Hoại tử gan tuỵ cấp tính (AHPND). Bệnh AHPND (gây ra bởi vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus mang plasmid sinh nhị độc tố PirA/PirB gây hoại tử cho phần gan tuỵ tôm) và WSD (gây ra bởi vi rút white spot syndrome virus - WSSV) là hai bệnh phổ biến thường gặp nhất trên tôm he (Penaeid) nuôi nước lợ và gây thiệt hại rất nặng nề do đây đều là bệnh truyền nhiễm có tính chất lây lan nhanh và gây tỷ lệ chết cao. Nhằm xây dựng một quy trình phát hiện nhanh đồng thời cả hai bệnh để giảm chi phí cho công tác chẩn đoán xét nghiệm và góp phần nhanh chóng phát hiện mầm bệnh, chúng tôi đã hoàn thiện quy trình duplex realtime PCR phát hiện cùng lúc hai bệnh này. Phản ứng được xây dựng đạt độ nhạy và độ đặc hiệu cao, giới hạn phát hiện tại giá trị LOD95 là 8 copy/phản ứng. Hiệu quả của phản ứng duplex realtime PCR được xây dựng với E= 95-96%, độ lặp lại cao. Quy trình đã được thực nghiệm trên 40 mẫu bệnh phẩm tôm cho kết quả tương đương với việc sử dụng singleplex realtime PCR cho từng bệnh.