Nghiên cứu xây dựng qui trình chuyển gen tế bào CHO bằng LipofectamineTM LTX - Ứng dụng tạo dòng tế bào CHO biểu hiện kháng thể Nivolumab

Abstract

Trong 30 năm qua, sản xuất protein tái tổ hợp đã trở thành một kỹ thuật quan trọng được ứng dụng chủ yếu vào các sản phẩm dược phẩm sinh học, trong đó có kháng thể đơn dòng được dùng để điều trị nhiều loại ung thư. Kháng thể đơn dòng Nivolumab đã được chứng nhận có thể loại bỏ di căn đối với u hắc tố, ung thư phổi không tế bào nhỏ, ung thư thận và ung thư hạch bạch huyết. Tuy nhiên, giá thành của thuốc này là rào cản lớn đối với nhiều bệnh nhân ung thư tại nước ta. Hiện nay, kháng thể đơn dòng và đa phần các loại protein tái tổ hợp khác được sản xuất với hệ thống biểu hiện là tế bào buồng trứng chuột túi má Trung Quốc (Chinese Hamster Ovary - CHO). Trong nghiên cứu này, sử dụng LipofectamineTM LTX làm nhân tố chuyển gen, một qui trình chuyển gen vào tế bào CHO có hiệu quả tốt đã được xây dựng dựa trên kết quả so sánh các điều kiện: lượng DNA sử dụng/tế bào; tỉ lệ giữa LipofectamineTM LTX và DNA sử dụng; và môi trường phục hồi tế bào sau chuyển gen. Bên cạnh đó, hai vector tái tổ hợp mang gen chuỗi nặng và chuỗi nhẹ của kháng thể Nivolumab cũng được thiết kế và biểu hiện thành công. Qui trình này và vector tái tổ hợp đã tạo được ứng dụng để tạo thành công dòng tế bào CHO biểu hiện ổn định kháng thể Nivolumab. Kết quả này có thể được thử nghiệm ứng dụng cho công tác tạo dòng biểu hiện các protein và kháng thể khác, làm tiền đề cho việc sản xuất thuốc hỗ trợ điều trị bệnh ung thư tại Việt Nam.