Nghiên cứu quá trình thu nhận và tinh sạch enzym laccase từ canh trường nuôi cấy nấm Vân Chi Trametes versicolor

Abstract

Nội dung đồ án tốt nghiệp gồm 4 chương. Chương 1: Tổng quan. Chương 2: Vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Chương 3: Kết quả và thảo luận. Chương 4: Kết luận và kiến nghị Laccase là một enzym oxi hóa khử đa đồng có thể oxy hóa được nhiều loại cơ chất bao gồm phenol, keton, phosphat, ascorbat, amin và lignin. Nghiên cứu được tiến hành nhằm xác định các yếu tố ảnh hưởng (thành phần môi trường nuôi cấy, thời gian nuôi cấy và phương pháp nuôi cấy) đến hoạt độ enzym laccase thu từ canh trường nuôi cấy nấm Vân Chi. Giống nấm Vân Chi được tiến hành nuôi cấy trên 5 công thức môi trường khác nhau và kết quả cho thấy môi trường tốt nhất là môi trường bao gồm: dịch khoai tây, glucose, KH2PO4, MgSO4, NH4+, Cu2+ và ABTS. Thời gian nuôi cấy được khảo sát tử 7 – 11 ngày với môi trường trên đạt hoạt độ cao nhất là 2,858 U/ml sau 8 ngày nuôi cấy. Nghiên cứu cũng đươc tiến hành để so sánh hiệu quả của các phương pháp nuôi cấy dịch thể (lắc, sục khí và lên men tĩnh) và kết quả thu được là phương pháp lắc có hiệu quả cao nhất. Nghiên cứu còn nhằm xác định ảnh hưởng của các tác nhân kết tủa đến hiệu quả kết tủa enzym laccase. Tỷ lệ dung dịch enzym thô và dung môi hữu cơ (ethanol, acetone) được thay đổi từ 1:1 đến 1:5 (v/v), tương tự nồng độ amonium sulfate bão hòa trong dịch enzym cũng dao động từ 40% đến 100%. Thời gian kết tủa thích hợp từ tác nhân được lựa chọn cũng được khảo sát. Kết quả cho thấy ethanol đạt hiệu quả kết tủa enzym laccase cao nhất. Tỷ lệ dung dịch enzym thô/ethanol là 1:3 (v/v) và thời gian kết tủa là 45 phút cho hiệu suất tủa đạt 78,12%. Khối lượng phân tử của enzym laccase được xác định bằng điện di là xấp xỉ 100 kDa.